Навигация
Главная
 
Главная arrow Экология arrow Ботаника - Неведомская ЕО
Предыдущая   СОДЕРЖАНИЕ   Следующая

2. Методи цитологічних досліджень

Микроскопия (от греч mikros - малый и skopeо - наблюдаю) - изучение под микроскопом - является основным методом цитологических исследований

Методы исследования с помощью светового (оптического) микроскопа (рис. 4) называют световой микроскопией способом изучать общий план строения клеток и их отдельные органеллы, размером не менее же 200 нм Современный световой микроскоп обеспечивает увеличение объектов в 2-3 тыс раз С его помощью можно увидеть большие органеллы (митохондрии, хлоропластыасти).

1 Объектив

2 Зажимы

3 Предметный столик

4 Зеркало

5 Окуляр

6 Тубус

7 Винты

Световая микроскопия основывается на том, что через прозрачный или полупрозрачный объект исследования проходят лучи света, которые впоследствии попадают на систему линз объектива и окуляра Линзы визуально сб бильшують объект исследования Кратность увеличения можно определить как произведение увеличений объект объектива и окулярра.

Клеточные структуры мелких размеров (например, рибосомы) открыто и исследовано с помощью электронного микроскопа, изобретенного в первой половине ХХ века Электронный микроскоп дает увеличение в в сотни тысяч раз (до 500 000 и более) и позволяет изучать ультраструктуры клеток - мельчайшие детали их строенийи.

Изготовление препаратов для световой и электронной микроскопии - достаточно сложная процедура Рассмотрим методику получения временных и постоянных препаратов

Методика получения временных препаратов во время исследования строения живых тканей и органов:

1 Изготовленные при помощи бритвы или микротома поперечные или продольные срезы помещают на предметное стекло в каплю воды, вазелиновое или силиконовое масло, слабый раствор сахара или в другие жидкие сред выше, не твердеют при высыханииі.

2 С целью лучшего наблюдения компонентов клетки и их дифференциации применяют прижизненное окраски клеток слабыми растворами химически инертных красителей - метиленового синего, нейтрального че ервоного да ин.

3 Накрывают покровным стеклом

Временные препараты можно рассматривать в течение нескольких часов, пока клетки не потеряли своей жизнедеятельности

Рассмотрим основные стадии получения постоянных препаратов:

1 Фиксация - остановка всех жизненных процессов клетки и сохранения ее структур Для этого применяют быстрое охлаждение или химические фиксаторы (спирт, формалин и др.)

2 Объекты изучения помещают в жидкую среду, которое быстро затвердевает Для световой микроскопии используют парафин или целлоидин, а для электронной - пластмассы Это позволит сделать из них тонкие срезы

3 С помощью специальных устройств (микротомов) делают тонкие срезы

4 Полученные срезы окрашивают различными веществами Например, для окраски ядра, которое содержит нуклеиновые кислоты, применяют красители с основными свойствами Срезы, предназначенные для электронной микро оскопии, окрашивают солями тяжелых металлов, атомы которых рассеивают электронони.

И в световом, и в электронном микроскопах объект рассматривается на просвет сквозь него проходит поток света или электронов Этот поток преломляется линзами В световом микроскопе линзы стеклянные, а в в электронном - это электромагниты Конденсор направляет световой или электронный поток на объект, а линзы, расположенные за объектом, формируют изображение Изображение рассматривают или фотографуютфують.

Кроме обычной микроскопии в видимых лучах используется также флуоресцентная (люминесцентная) и ультрафиолетовая микроскопия При этом препараты освещают сине-фиолетовыми или ультрафиолетовыми лучами, которые обусловливают свечение (флуоресценцию) многих органических веществ клетки (пигментов, витаминов, алкалоидов и др.) Применяют также специфические красители - флуорохромы, которые образуют флу оресциюючи соединения с теми веществами клеток, не имеющих способности к естественной флуоресценции такие флуоресцирующие препараты рассматривают в микроскоп и проявляют расположение и количество отдельных компонентов тов клеток, такие детали и тонкости строения, не наблюдаются при обычной микроскопии Благодаря флуоресцентной микроскопии можно исследовать живые, не зафиксированные или слегка окрашенные клетки в пр епаратаратах.

Другими методами цитологических исследований являются:

o центрифугирования (клетку подвергают разрушению, а затем разделяют смесь органелл в центрифуге при высокой скорости вращения; органеллы оседают на дно пробирки, распределяясь слоями согласно своей плотности; каждый н слой можно выделить и исследовать отдельно) Этот метод применяют для изучения отдельных клеточных структур 1955 бельгийский ученый Кристиан де Дюв благодаря использованию этого метода открыл лизосомы, за что ему была присуждена Нобелевская премияю;

o метод"меченых атомов\" или авторадиография (в клетку вводят вещество, в котором один из атомов определенного химического элемента замещен его радиоактивным изотопом; при помощи специальных приборов, способных фиксировать эти изотопы, можно проследить за миграцией этих веществ в клетке и их преобразованием)

o метод культуры клеток (изолированные живые клетки переносят в стерильную питательную среду, которое похоже на естественное для них среду; при таких условиях клетки способны размножаться и проявлять другие признаки жизнедеятельности; меняю кая среда, можно изучать его влияние на клетки) Благодаря этому методу для исследования токсического действия определенных веществ не теряют лабораторных животных Достаточно воспользоваться клетками, выращенными в ша ьтури На таких модельных системах можно проверять действие лекарственных препаратов, стимуляторов, различных физических и других факторов Использование культуры клеток человека чрезвычайно важно для медицинских и би ологичних исследований Оно может заменить недопустимые с этической точки зрения эксперименты на людях На основе этого метода разработан клеточные технологии, с помощью которых конструируются организмы с зада ними заранее свойствами Так, из нескольких растительных клеток удается вырастить целое растениеослину;

o метод прижизненного изучения (исследуют живые клетки, их процессы жизнедеятельности - движение цитоплазмы, деление и т.д.)

 
Предыдущая   СОДЕРЖАНИЕ   Следующая
 
Дисциплины
Банковское дело
БЖД
Бухучет и Аудит
География
Документоведение
Экология
Экономика
Этика и Эстетика
Журналистика
Инвестирование
Информатика
История
Культурология
Литература
Логика
Логистика
Маркетинг
Медицина
Менеджмент
Педагогика
Политология
Политэкономия
Право
Естествознание
Психология
Религиоведение
Риторика
РПС
Социология
Статистика
Страховое дело
Товароведение
Туризм
Философия
Финансы